توسعه یک real-time pcr چندگانه جهت تشخیص همزمان ویروسهای لوسمی سلولهای tانسانی و ویروس هپاتیت b با استفاده از پروب های molecular beacon

یکی از مشکلات قابل توجه در زمینه انتقال خون و فرآورده های خونی، می توان به خطر انتقال عوامل عفونی از جمله ویروس هپاتیت b و ویروس لوسمی سلول های t انسان (htlv) و … اشاره کرد. از راهکارهای قابل توجهی که تاکنون برای رفع این مشکل ارائه شده است و به کاهش میزان انتقال این عوامل عفونی کمک کرده است، می توان به طراحی آزمایش های سرولوژیکی حساس برای غربالگری آنتی ژن سطحی ویروس هپاتیت b (hbs ag) و آنتی بادیهای تولید شده htlv اشاره کرد. با این حال باز مواردی از ابتلای افراد به این عوامل گزارش شد که از جمله علل آن می توان به تغییرات آنتی ژنیک ویروس، آلودگی با سروتیپ های مختلف ویروسی، ناقلان خاموش از نظر ایمونولوژیکی یا ناقلین پنهان و یا نبود آنتی بادی در مراحل اولیه بیماری اشاره کرد.در دهه اخیر، به منظور رفع این مشکل، روشهای مبتنی بر اسیدنوکلئیک (nucleic acid testing: nat) برای شناسایی نوکلئیک اسید ویروسها (dna یا rna) توسعه یافته اند. از مزایای nat می توان به بررسی مستقیم و اختصاصیت بسیار زیاد آن برای ژنوم یک عامل عفونی و تعیین میزان بار گیری ویروس در خون، نسبت به روشهای سرولوژیک یا روشهای جداسازی ویروس (به منظور شناسایی آن عامل عفونی) اشاره کرد.اگرچه امکان انجام و کارآیی بالای nat برای غربالگری خونهای اهدایی به اثبات رسیده است، با اینحال استفاده از آن در مقیاس وسیع به صورت محدود بوده که از دلایل آن به هزینه زیاد و وقتگیر بودن می توان اشاره کرد. در این تحقیق با استفاده از روش multiplex real-time pcr و با استفاده از پروب های molecular beacon که هر یک مختص توالیهای کاملاً حفاظت شده هر ویروس بوده و هر کدام با رنگ فلورسنت خاصی نشاندار شده، این دو ویروس را تشخیص داده و همچنین توانستیم با تهیه استانداردهای پلاسمیدی و رسم منحنی استاندارد،روشی را برای تعیین میزان بار گیری این ویروس ها در خون اندازه گیری کنیم